Trang: 239
Tập XXV, số 8 (168) 2015 Số đặc biệt
Phát triển phản ứng multiplex PCR chứa chứng nội tại tái tổ hợp xác định đồng thời vi khuẩn Bacillus anthracis và Yersinia pestis
Development of a multiplex PCR including a recombinant internal amplification control for simutaneous detection of Bacillus anthracis and Yersinia pestis
Tác giả: Đinh Thị Thu Hằng, Nguyễn Thái Sơn, Nghiêm Ngọc Minh
Tóm tắt:
Nghiên cứu phát triển các kỹ thuật dựa trên PCR xác định nhanh, chính xác tác nhân khủng bố sinh học, đặc biệt là Bacillus anthracis và Yersinia pestis đang được quan tâm hiện nay. Công trình này đã phát triển một phản ứng PCR đa mồi chứa chứng nội tại tái tổ hợp xác định đồng thời B. anthracis và Y. pestis gây bệnh trong tự nhiên. Nghiên cứu thực hiện trên tám chủng B. anthracis Ba1-Ba8, một chủng Y. pestis Yp1 lưu giữ tại Học viện Quân y được bất hoạt 121°C/20 phút trước khi tách chiết ADN. Chứng nội tại plasmid pJET1.2-capA-IC1 (thiết kế sử dụng chung cặp mồi chẩn đoán capAF1/R1 phát hiện B.anthracis) được bổ sung vào mẫu trong quá trình tách chiết để xác minh kết quả chẩn đoán, loại bỏ hiện tượng âm tính giả. Thực hiện tối ưu nồng độ chứng nội tại và các thành phần trong phản ứng PCR đa mồi (cặp mồi vrrAF1/R1, pagAF1/R1, capAF1/R1 cho B. anthracis và ypo2088F1/R1, plaF1/R1, caf1F1/R1 cho Y. pestis). Nồng độ chứng nội tại tối ưu được xác định là 5x104 copies/phản ứng. Đây là nghiên cứu mới về một phản ứng PCR đa mồi chứa chứng nội tại chẩn đoán chính xác, đồng thời B. anthracis, Y. pestis gây bệnh ở Việt Nam, đáp ứng yêu cầu về an ninh quốc phòng và phòng chống dịch bệnh.
Summary:
Development of PCR based techniques for
rapid and accurate detection of bioterrorism
agents, especially Bacillus anthracis and Yersina
pestis has become more concern in recent years.
In this study, a novel multiplex PCR including a
recombinant internal amplification control was
developed for simultaneous detection of B. anthracis
and Y. pestis. The study was carried out
on eight B. anthracisBa1-Ba8 strains, which were
provided by the Military Institute of Preventive
Medicine, Military Medical Department and a
Y. pestis Yp1 strain provided by Strain and Gene
Bank of Vietnam Military Medical University.
Bacterial cultures were inactivated at 121°C/20
minutes before DNA extraction following manufacturer’s
instructions. The known concentrations
of the recombinant internal amplification control
pJET1.2-capA-IC1, which was designed with
primer sequences capAF1/R1, were added to the
samples before DNA extraction to exclude false
negatives and verify diagnostic results. We optimized
the internal amplification control concerntration
and the multiplex PCR components with
prime pairs vrrAF1/R1, pagAF1/R1, capAF1/R1
for B. anthracis and ypo2088F1/R1, plaF1/R1,
caf1F1/R1 for Y. pestis, which co-amplified diagnostic
target genes and internal amplification control.
The internal amplification control concentration
of 5x104 copies/reaction was determined and
the multiplex PCR protocol was optimized. This
is the first publication of a multiplex PCR including
a recombinant internal amplification control
for simultaneous detection of B. anthracis and Y.
pestis in Vietnam which is necessary for national
defense and security requirements and disease
prevention.
Từ khóa:
Âm tính giả, chứng nội tại, PCR đa mồi, vi khuẩn than, vi khuẩn dịch hạch
Keywords:
False negative, internal amplification control, multiplex PCR, Bacillus anthracis, Yersinia pestis.
File nội dung:
O158239.pdf
Tải file:
