Trang: 526
Tập 27, số 8 2017
Áp dụng dung dịch ly giải tế bào (TpLR) trong tách chiết nhanh ARN trên nuôi cấy tế bào
Application of a rapid lysis buffer (TpLR) for rapid RNA extraction from cell culture
Tác giả: Nguyễn Thị Thường, Nguyễn Đăng Hiền, Nguyễn Trần Hiển, Trần Thị Hiền, Phạm
Thị Bích Ngọc, Thẩm Chí Dũng
Tóm tắt:
ARN có chất lượng là yếu tố đầu tiên và quan trọng nhất ảnh hưởng đến RT-PCR nên rất cần nỗ lực để
đơn giản hóa và tăng cường chất lượng tách chiết. Dung dịch ly giải nhanh tế bào (TpLR) đã được sử dụng
thành công trong tách chiết ADN, xây dựng các phương pháp mới trong chẩn đoán, nghiên cứu, và sản
xuất. Nghiên cứu này xác định đầy đủ hơn sự tương quan và tính bền vững của ARN tách chiết bằng TpLR
và sinh phẩm thương mại sau khi gây nhiễm vắc-xin sởi trên tế bào Vero ở nồng độ đặc và pha loãng hàng
loạt bậc mười từ 10-1 đến 10-4 và định lượng RNA bên trong tế bào sau 72 giờ gây nhiễm với các điều kiện
bảo quản theo nhiệt độ và thời gian thực (17 tháng ở -80oC và -30oC). Kết quả cho thấy tách chiết ARN
bằng TpLR và sinh phẩm thương mại cho kết quả tương đương với R2 của giá trị chu kỳ ngưỡng (Ct) từng
cặp dao động từ 0,92-1,0 sau gây nhiễm 24, 48, và 72 giờ. Hiệu giá tuyệt đối ARN không khác biệt sau 12
và 15 tháng ở -80oC, và 2 tháng bảo quản tiếp ở -30oC. Có thể sử dụng TpLR để tách chiết ARN trên nuôi
cấy tế bào với ưu điểm đáng kể về thời gian, kinh phí và hiệu suất thực hiện.
Summary:
Qualified RNA is the first and most important
factor affecting the RT-PCR. It is essential to
put efforts to simplify and improve the RNA
extraction quality. The rapid lysis buffers
(TpLRs) have been successfully applied in DNA
extraction, development of new methods in
diagnostics, research, and production. This study
determined, in another aspect, the correlation of
a TpLR and commercial test kit (Qiagen), the
stability of RNA extracted by the study reagent
after inoculating measles vaccine undiluted
and ten-fold serial dilutions from 10-1 to 10-4
on Vero cells. RNA within the infected cells
was quantified after 72 hours post inoculation
and at different conditions of real temperatures
and real times (total of 17 months at -80oC
and -30oC). The results showed that the ARN
extraction efficiency by TpLR and Qiagen kit
was similar with R2 of threshold value (Ct) by
pairs felt within the range of 0.92-1.0 at all time
points of 24, 48, and 72 hours post-inoculation.
Absolute RNA titers of both reagents did not
differ significantly after 12 and 15 months at
-80oC as well as 2 next consecutive months at
-30oC. We concluded that the study TpLR could
be used for RNA extraction from infected cells
with remarkable advantages in the time, cost,
and performance.
Từ khóa:
TpLR, tách chiết, ARN, sởi.
Keywords:
TpLR, extraction, RNA, measles.
File nội dung:
o1708526.pdf
Tải file:
