Trang: 549
Tập 27, số 8 2017
Thiết lập bộ mẫu chuẩn HBV-DNA trong kiểm định các xét nghiệm axit nucleic của vi rút viêm gan B
Establishment of an in-house HBV-DNA standard for validation of nucleic acid testing of Hepatitis B virus
Tác giả: Hoàng Xuân Sử, Lê Thị Bảo Quyên, Đinh Thị Thu Hằng
Tóm tắt:
Các bộ mẫu chuẩn HBV-DNA có vai trò rất quan trọng trong việc phát triển và đánh giá các xét nghiệm
axit nucleic của virus viêm gan B bao gồm cả định lượng và định tính. Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã
thiết lập 2 bộ mẫu chuẩn HBV-DNA nội bộ theo con đường tái tổ hợp. Trình tự gen S đặc hiệu của vi rút
viêm gan B (Hepatitis B virus - HBV) kiểu gen B và C được tạo dòng tạo các thể plasmid chứa gen đích.
Các bộ mẫu chuẩn HBV-DNA được thiết lập bằng cách pha loãng plasmid từ nồng độ gốc theo hệ số 10
trong nước khử ion, đường chuẩn định lượng được xây dựng, đánh giá các bộ mẫu chuẩn bằng kỹ thuật
realtime PCR về độ chính xác, độ ổn định theo thời gian; sử dụng trong định lượng HBV-DNA trên 30 mẫu
huyết tương bệnh nhân viêm gan B mạn tính và 30 mẫu huyết tương người khỏe mạnh (HBsAg(-)). Các
bộ mẫu chuẩn với dải nồng độ từ 101-109 copies/phản ứng, đường chuẩn tuyến tính với hệ số xác định
R2 =0.9981, hiệu quả khuếch đại cao (E=94%). Khi đánh giá trên mẫu lâm sàng, định lượng HBV-DNA
bằng bộ mẫu chuẩn nghiên cứu tương đương kit thương mại RealStar® HBV PCR 1.0 (Altona Diagnostics,
Đức) khi phân tích bằng phương trình hồi quy tuyến tính và biểu đồ Bland-Altman. Bộ mẫu chuẩn có độ
chính xác cao (hệ số biến thiên thấp), độ ổn định trên 6 tháng. Như vậy, bước đầu đã thiết lập thành công
các bộ mẫu chuẩn HBV-DNA của 2 kiểu gen B và C, làm tiền đề cho phát triển và kiểm định kit chẩn đoán
axit nucleic của HBV ở Việt Nam
Summary:
HBV-DNA reference standards play a
crucial role in development and validation of
nucleic acid tests of Hepatitis B virus including
both quantitative asays and qualitative assays.
In this study, we established an in-house HBVDNA
standard according to WHO and NIBSC
guidelines using a set of plasmids containing
a partial S gene of HBV genotype B and C by
serial 10-fold dilution of a concentrated stock
plasmid solution. Quantitative calibration was
constructed and quantification standards were
evaluated by an optimal HBV real time PCR for
dynamic range, precision, long-term stability.
The in-house standards was compared with a
commercial assay for quantification of HBVDNA
using 30 plasma samples of chronic
hepatitis B individuals and 30 plasma samples
of health control, who are negative for HBsAg.
The dynamic range of standards from 101-109
copies/reaction, the coefficient of correlation
is very good (R2 = 0.9971) and high-efficiency
(E = 94%). Evaluation of clinical performance
showed a good correspondence between HBVDNA
levels measured by using the in-house
HBV-DNA standards and RealStar® HBV
PCR kit 1.0 (Altona Diagnostics, Germany)
when analyzed by linear regression and Bland-
Altman plot. The in house standards were
proved with high accuracy by low coefficient of
variation, were stable at -20oC for over 6 months.
In conclusion, we successfully established of
HBV-DNA standards of genotypes B and C for
development and validation of HBV nucleic
acid test kits in Vietnam.
Từ khóa:
Bộ mẫu chuẩn, kiểu gen, realtime PCR, vi rút viêm gan B.
Keywords:
Standards, Genotype, realtime PCR, Hepatitis B virus.
File nội dung:
o1708549.pdf
Tải file:
