Trang: 135
Tập 27, số 11 2017
Thẩm định và ứng dụng phương pháp Realtime PCR trong sàng lọc và chẩn đoán sớm Leptospira trên các loại mẫu bệnh phẩm
Verification and application realtime PCR assay for screening and diagnostic Leptospira from infectious samples
Tác giả: Hoàng Kim Loan, Đinh Thị Ngọc Anh, Lạc Ngọc Thêm, Nguyễn Viết Chánh, Phùng
Lê Trâm, Nguyễn Minh Châu, Lê Thanh Tùng, Phạm Công Trung, Vũ Thị Quế Hương
Tóm tắt:
Chúng tôi đã tiến hành xác nhận giá trị sử dụng và ứng dụng kỹ thuật realtime PCR để phát hiện nhanh
Leptospira spp. bằng gen đích rrs(16S) trên một các loại mẫu bệnh phẩm gồm huyết thanh bệnh nhân và
mô thận động vật gặm nhấm. Kết quả cho thấy, độ đặc hiệu của phản ứng là 100%, chỉ có tín hiệu khuếch
đại trên chủng Leptospira gây bệnh, không có tín hiệu khuếch đại ADN trên chủng Leptospira không gây
bệnh,, giới hạn phát hiện là 70 fg trên 1 phản ứng, hiệu quả khuếch đại R2 trong khoảng 99,3% - 99,9%.
Kết quả ứng dụng phương pháp này đã phát hiện được 1/20 mẫu huyết thanh bệnh nhân và 10/30 mẫu
mô động vật gặm nhấm có tín hiệu khuếch đại Leptospira. Kết quả trên được kiểm tra lại bằng kỹ thuật
PCR truyền thống và đã xác định được 10 mẫu dương tính trong tổng số 11 mẫu có tín hiệu khuếch đại với
realtime PCR. Kỹ thuật realtime PCR trên gen rrs (16S) hoàn toàn có thể áp dụng trong sàng lọc và chẩn
đoán nhanh Leptospira từ mẫu huyết thanh người và mô thận động vật gặm nhấm tại phòng thí nghiệm.
Từ khóa: Realtime PCR, Leptospira, Việt Nam
Summary:
We performed verification and application
of realtime PCR for rapid detection of
Leptospira spp. with the target gene rrs
(16S) from infectious samples including
human serum and rodents kidney tissue.
The specificity determined by performing
realtime different microorganisms generated
an excellent result with no amplification of all
samples and discriminate pathogenic and non
pathogenic species. The sensitivity evaluated
by carrying out the test on DNA dilutions
reaching 70 fg per reaction was an ideal level
for most of PCR assays. The PCR efficiency
was estimated through the slope of standard
curve and provided a reasonable value in a
range from 99.3% to 99.9%. Clinical samples
from 20 suspected leptospirosis patients and 30
rodent kidney tissues are tested by this assay.
We found 1(5%) sample of human sera and
10 (33,3%) rodent kidney tissues detectable
signal. The conventional PCR confirmed
the detection of Leptospira species in 10/11
samples. This assay can be applied to human
sera and rodent kidney tissue for testing in a
laboratory.
Từ khóa:
NA-FLOURTM, tính kháng thuốc, vi rút cúm, khu vực phía Nam Việt Nam.
Keywords:
realtime PCR, Leptospira spp., Vietnam
File nội dung:
o1711135.pdf
Tải file: