Trang: 21
Tập XXVI, số 8 (181) 2016
Xây dựng quy trình sản xuất nha bào Clostridium difficile in vitro
Set up standrad protocol for in vitro production of Clostridium difficile spores for evaluating the sporicidal efficacy of disinfectants
Tác giả: Tăng Thị Nga, Lê Thị Thu Hường, Đặng Thị Thùy Dương, Vũ Thị Thu Hường
Tóm tắt:
Nghiên cứu này xây dựng thành công quy trình sản xuất nha bào của vi khuẩn Clostridium difficile (C. difficile) trong phòng thí nghiệm đạt tiêu chuẩn E2839-11 của Hiệp hội thử nghiệm vật liệu Hoa kì (ASTM) bao gồm nồng độ nha bào >108 CFU/ml, độ tinh khiết ≥ 95% và nha bào kháng với axít HCl 2,5M trong 10 phút. Mười bảy chủng vi khuẩn C. difficile đưa vào nghiên cứu gồm 2 chủng quốc tế C. difficile không sinh độc tố ATCC 43593 và ATCC 700057 và 15 chủng C. difficile sinh độc tố phân lập từ bệnh nhân tiêu chảy sau dùng kháng sinh. Chúng tôi chọn được 8 chủng có khả năng tạo thành thảm dày sau 11 ngày ủ, trong đó có 6 chủng có tỉ lệ chuyển dạng nha bào so với tế bào sinh dưỡng đạt hơn 90%. Trong số 6 chủng này, 3 chủng C. difficile được sử dụng để tối ưu hóa quy trình sản xuất nha bào gồm các bước thu hoạch, rửa và tinh khiết nha bào và thử khả năng kháng axít HCl 2,5M của nha bào. Chúng tôi đã sản xuất thành công tổng số 35 ml nha bào đạt tiêu chuẩn E2839-11của ASTM. Nha bào này là vật liệu cần thiết để đánh giá khả năng diệt nha bào của các chất khử trùng trong môi trường bệnh viện.
Summary:
We have sucessfully established a protocol
for in vitro production of Clostridum difficile
(C. difficile) spores that met standard criteria of
American Society for Testing Material (ASTM
E2839-11). The ASTM criteria include: (1) a
spore titer of > 108 cfu/ml; (2) purity of spore ≥
95%; (3) resistance to 2.5M HCl for 10 minutes.
Seventeen strains of C. difficile were used to set
up the experiment. They included C. difficile
ATCC 43593 and ATCC 700057 and 15 clinical
toxigenic strains isolated from patients with
antibiotic- associated diarrhea. Of the 15 strain,
8 strains grew well and made thick colony layer
on GAM-H agar. Only 6 strains out of 8 strains
obtained degree of conversion of spores to
vegetative cells ≥ 90 % after 11 days of anarobic
incubation. Of the 6 strains, we selected 3 strains
for the next steps of experiments to determine
the optimal purification and test for spore titer
and acid resistance. Totally, we produced 35 ml
of spore suspension that met the above criteria
of ASTM E2839-11. The spore suspension is the
necessary material for evaluating the sporicidal
efficacy of disinfectants used in hospital
environment.
Từ khóa:
nha bào, Clostridium difficile, chất khử trùng bệnh viện
Keywords:
Spore suspension, Clostridium difficile, disinfectants
File nội dung:
O160821.pdf
Tải file:
