Trang: 148
Tập XXIII, số 11 (147) 2013
Nghiên cứu chế tạo Nucleoprotein tái tổ hợp của vi rút dại định hướng phát triển các sinh phẩm chẩn đoán
Study on preparation of recombinant Nucleoprotein of rabies virus for development of diagnosiitic reagents and kits
Tác giả: Nguyễn Thị Kiều Anh, Nguyễn Vĩnh Đông, Nguyễn Tuyết Thu,
Satoshi Inoue, Minoru Tobiume
Tóm tắt:
Trong những năm gần đây, Việt Nam đang phải đối mặt với sự gia tăng các ca bệnh dại. Việc nghiên cứu
các kỹ thuật và sản xuất sinh phẩm chẩn đoán nhanh hỗ trợ cho giám sát, phát hiện bệnh dại ở ổ chứa,
vector là điều quan trọng giúp cho chương trình phòng chống bệnh dại hiệu quả. Mục tiêu đề tài nhằm
nghiên cứu chế tạo kháng nguyên tái tổ hợp nucleoprotein của vi rút dại định hướng phát triển sinh phẩm
chẩn đoán. Để đạt được sản lượng protein cao và dễ dàng tinh chế trên nước nổi nuôi cấy tế bào, protein
N của vi rút dại được đồng biểu hiện với protein 3xFlag trên tế bào động vật có vú 293T thông qua việc
tách dòng đoạn gen mã hóa protein N chèn vào plasmid pCAGGS chứa đoạn gen mã hóa protein 3xFLAG
được tách từ plasmid p3xFLAG-CMV-8. Kết quả đã thiết kế được plasmid mang gen mã hóa protein N của
vi rút dại và protein 3xflag. Thử nghiệm chuyển nhiễm, đồng biểu hiện protein 3xFLAG – N của vi rút dại
trên dòng tế bào 293T cho thấy từ 100ml nước nổi nuôi cấy tế bào tinh chế được 1,6mg kháng nguyên tinh
khiết với nồng độ 0,8mg/ml. Cần có những nghiên cứu tiếp để xây dựng hệ thống ngân hàng chủng giống
tế bào và hoàn thiện quy trình tinh chế protein ứng dụng cho việc phát triển các sinh phẩm chẩn đoán và
nghiên cứu vi rút dại.
Summary:
Recently, Vietnam has been facing the problem
of rapidly increasing rabies cases. The development
of techniques and reagents/kits for
quick diagnosis supporting for surveillance and
detection of the disease in reservoirs and vectors
are very important for rabies control and
prevention program. This study aimed to develop
recombinant nucleoprotein (N protein) of rabies
virus for development of reagents and kits
for rabies and lyssavirus detection. To express
protein in the supernatant of transfected cell for
easier purification and to get high yield of protein,
N protein was co-expressed with 3x Flag
protein in mammalian 293 T cell by cloning
N gene and inserting into modified pCAGGS
plasmid which was previously inserted 3x Flag
gene extracted from p3xFLAG-CMV-8 plasmid.
Then, the modified pCAGGS plasmid inserted
N gene was transfected into 293 T cell
for protein expression. The successful expression
of N protein was carried out. A total of
1.6mg purified N recombinant protein with the
concentration of 0.8mg/ml was purified from
100 ml of supernatant of transfected 293T. This
is prototype success of construction of mammalian
cell line which expresses nucleoprotein
of rabies virus. The study should go further for
production of cell bank as well as completion
of protein purification process to develop reagents
and kits for rabies diagnosis and research.
Từ khóa:
Nucleoprotein, tái tổ hợp, vi rút dại.
Keywords:
Nucleoprotein, recombinant, rabies virus.
File nội dung:
yhdp_origin148_11_2013.pdf
Tải file:
