Trang: 10

Tập XXIII, số 11 (147) 2013

Set- up a new assay to identify the intracellular ARN titer of measles vaccine by Real-Time RT - PCR

Tác giả: Nguyễn Thị Thường, Nguyễn Đăng Hiền, Huỳnh Phương Liên, Nguyễn Trần Hiển, Phạm Thị Bích Ngọc, Trần Thị Hiền

Tóm tắt:
Những tiến bộ nhanh chóng, không ngừng của khoa học vắc-xin và công nghệ phòng thí nghiệm đã cho ra đời các phương pháp kiểm định tương ứng. Tế bào Vero được gây nhiễm vắc-xin chuẩn và thành phẩm của 3 lô vắc xin ở các độ pha loãng 10 lần từ đặc đến 10-4. ARN trong tế bào gây nhiễm được tách chiết ở 24 giờ, 48 giờ, và 72 giờ bằng kít thương mại sau khi đã trypsin hóa hoặc làm tan tế bào bằng dung dịch ly giải nhanh (TpLR) và được gặt trực tiếp chỉ bằng TpLR. Hiệu giá ARN >10-2 ở 24 giờ nằm trong khoảng tuyến tính của gam chuẩn (101 - 106 bản sao), đạt giai đoạn “tạo hình phẳng” và nằm ngoài khoảng tuyến tính sau 48 giờ. ARN gặt bằng TpLR tương quan chặt chẽ, không có sự khác biệt tuyệt đối với tách chiết bằng kít thương mại (R>0.96, p>0,05) và ổn định sau 1 năm ở -80oC. Tính lặp lại của một lần và giữa các lần làm phản ứng tương ứng là 0,8% và 2,2%. Hiệu giá ARN trung vị là 2,62x107 bản sao/ml vắc-xin và lớn hơn PFU 1,83x103 lần. Kỹ thuật mới xác định hiệu giá vắc-xin sởi sống bằng định lượng ARN trong tế bào Vero gây nhiễm ở 24 giờ chỉ với nồng độ đặc và pha loãng vắc-xin 10-1 có nhiều ưu điểm về độ chính xác, thời gian, tính giản tiện, tự động hóa và hiệu quả kinh tế.

Summary:
The ongoing and rapid changes in vaccine science and advances in laboratory technology have led to a parallel development of vaccine quality control methods. Vero cells were inoculated in duplicates with reference and three final products of live measles vaccine at 10-fold dilutions from undiluted to 10-4. PFU was identified at day 7. RNA intracellular infected cells trypsinized or lyzed by rapid lysis buffer (TpLR) was extracted at 24h, 48h, and 72h post-inoculation by commercial kits, and harvested directly using only TpLR. RNA could be quantified 24 hours post-inoculation at until 10-2 and data felt into the linearity range of standard game (101-106 copies), seemed to reach the “plateau phase” and out of linearity after 48h. RNA harvested by TpLR strongly correlated with and there was no absolute difference from that extracted by commercial kit (R>0.96) and was stable after one year at -80oC. Repeatability within and between runs was 0.8% and 2.2%, respectively. Median of RNA titer was 2.62x107 copies/ml vaccine and higher than that of PFU of 1.83x103 times. A new assay to identify the RNA titer of live measles vaccine by quantification at 24 hours post-inoculation of RNA viral load intracellular Vero cells infected with undiluted or at the dilution of 10-1 was established and had advantages in terms of accuracy, time, simplification, automation and cost effectiveness.

Từ khóa:
Vắc xin sởi, real-time, bên trong tế bào gây nhiễm, hiệu giá, ly giải nhanh tế bào

Keywords:
measles vaccine, real-time, intracellular infected cell, titer, rapid cell lysis.

File nội dung:
yhdp_origin10_11_2013.pdf

Tải file:

Tải file với tiền ảo trong tài khoản thành viên.