Trang: 170
Tập 27, số 2 (190) 2017
Tái tổ hợp enzym giới hạn mới sử dụng gene tương tự Mae843ORF8180 phân lập từ mẫu nước tự nhiên ở Hà Nội
Recombination of a novel restriction enzyme using aMAE843ORF8180 - like geneisolated from natural samples
Tác giả: Lê Thị Kim Tuyến, Nguyễn Thị Mai Phương
Tóm tắt:
Các thành viên nhóm enzym giới hạn R-M IIG có đồng thời hai chức năng “cắt giới hạn” và “sửa đổi” trình
tự nucleotide. Trong nhóm này có các họ enzym được tìm thấy với trình tự acid amin giống nhau cao bằng
phần mềm Basic Local Alignment Search Tool (BLAST), National Center for Biotechnolgy Information
(NCBI). Gen Mae843ORF8180 của Microcystis aeruginosa được chọn lọc in silico là giả định mã hóa cho
một enzym giới hạn R-M IIG vì thuộc danh sách của họ enzym giống HauI. Kỹ thuật PCR sử dụng cặp
mồi thiết kế từ hai đầu trình tự 3’ và 5’ của gen Mae843ORF8180 được áp dụng để sàng lọc trực tiếp gen
đích của toàn bộ ADN tách chiết từ một mẫu nước ao hồ màu xanh thu thập ở Cầu Diễn, kết quả cho phản
ứngdương tính. Sản phẩm PCR được clon vào vectơ pSAPv6 và biểu hiện protein ở vi khuẩn Escherischia
coli. Protein tái tổ hợp thu được có hoạt tính của enzym giới hạn, có khả năng nhận biệt trình tự đặc hiệu
mới 5’GCAAAAG 3’.
Summary:
Type IIG R - M enzymes are single
proteins bearing both endonuclease and
methyltransferase activities. When they
belong to the same family, they show highly
similar amino acid sequences though they can
recognize a great diversity of DNA sequences.
Type IIG R-M family enzymes can be screened
throughout the GenBank database using BLAST
software. Mae843ORF8180 gene belonging to
Microcystis aeruginosa has been identified in
silico and presumed to code for a type R-M IIG
enzyme because it shares sequence similarity
with the HauI family. PCR technique using
primers designed at the beginning and the
end of the gene sequence has been performed
to test environmental DNA extracted from
green pond water samples. A sample picked
up in Cau Dien (CD) region has been found
positive. The PCR product was cloned into
Escherischia coli. Theexpressed recombinant
CD protein presented an endonuclease activity.
The sequence specificity of the CD enzyme has
been identified as 5’GCAAAAG3".
Từ khóa:
in silico; enzym giới hạn-sửa đổi RM IIG; tách dòng gen; biểu hiện gen; xác định tính đặc hiệu enzym giới hạn
Keywords:
in silico; RM IIG modificationrestriction enzymes; gene cloning; gene expression; restriction enzyme specificity determination.
File nội dung:
o1702170.pdf
Tải file:
